ELISA試劑盒操作時到底需要注意哪些細(xì)節(jié)？

1. 首先我們在做ELISA試劑盒實驗前，必須先搞清楚它的原理。ELISA試劑盒分幾種類型。一般可將ELISA分為以下幾種類型，實驗君首先需要根據(jù)自己的待檢物來確定試劑盒類型。

1) 雙抗體夾心法：針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測抗體。適用于測定二價或二價以上的大分子抗原如血漿中的細(xì)胞因子，不適用于測定半抗原及小分子單價抗原。同理，也有雙抗原夾心法測抗體。

2) 直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗，即可測定抗原總量。此法操作手續(xù)簡短，因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。

3) 間接法：間接法是檢測抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）來檢測與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。

4) 競爭法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法模式。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。

2. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

3. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

4. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

5. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

6. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

7. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。

8. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

9. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

10. 不能使用過期產(chǎn)品。

11. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

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原創(chuàng)作者：上海臻科生物科技有限公司