一、人基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

11月25日消息，上海臻科報(bào)道：人基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)ELISA檢測(cè)試劑盒是采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

二、人基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)ELISA檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

1.品種齊全、質(zhì)量可靠、靈敏度高、穩(wěn)定性好、操作簡(jiǎn)便。

2.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。

3.重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15% 。

4.同城（上海）需要代測(cè)可免費(fèi)上門(mén)取樣，享送貨上門(mén)的服務(wù)。

5.根據(jù)客戶(hù)需求可以根據(jù)客戶(hù)的要求定制elisa試劑盒。

6.臻科生物可提供全方位的售前、售中、售后技術(shù)支持,為您解決實(shí)驗(yàn)過(guò)程中遇到的問(wèn)題。

三、人基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)ELISA檢測(cè)試劑盒標(biāo)本要求

1.血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。Zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

四、試劑盒組成 

五、操作流程

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

六、注意事項(xiàng)

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 封板膜只限一次性使用，避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。底物請(qǐng)避光保存

7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

七、關(guān)于人基質(zhì)金屬蛋白酶14(MMP-14)ELISA檢測(cè)試劑盒承諾

公司長(zhǎng)期與各大高校、醫(yī)院及權(quán)威科研單位保持著良好的合作關(guān)系，公司的產(chǎn)品質(zhì)量及服務(wù)態(tài)度得到了他們的一致認(rèn)可。臻科生物本著客戶(hù)至上的原則為客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，公司承諾產(chǎn)品有任何質(zhì)量的問(wèn)題免費(fèi)包退換（非人為因素造成的）。公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，并且承諾收到樣本七個(gè)工作日出結(jié)果，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。詳情可聯(lián)系我司客服了解。

更新時(shí)間：2024/8/7 14:44:53